Caracterización parcial de la actividad de esterasas en una cepa de Aedes aegypti resistente a temefos / Partial characterization of esterase activity in a temephos-resistant Aedes aegypti strain

Introducción: las enzimas esterasas han sido identificadas como mecanismo de resistencia a temefos en Aedes aegypti de Cuba, larvicida más utilizado en el mundo. Objetivo: caracterizar parcialmente la actividad de esterasas en larvas expuestas y no expuestas a dosis subletales de temefos en una cepa de Aedes aegypti resistente a este insecticida. Métodos: se utilizó una cepa de Aedes aegypti de referencia susceptible (Rockefeller) y otra resistente a temefos (SANtemF11). Se expusieron las larvas de la cepa SANtemF11 a la concentración letal 90 (CL90) de temefos (1 ppm), 10 % de larvas sobrevivientes a las 24 h (SANtem [24 h]) se transfirieron a agua limpia y sin exposición a insecticidas por otras 24 h (SANtem [48 h]). Se caracterizó de modo parcial, en estas larvas, la actividad de esterasas a través de ensayos bioquímicos y electroforesis en gel de poliacrilamida. Se estimó por duodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE) el peso molecular de la esterasa (Est. A4). Resultados: la actividad de esterasas en la cepa SANtemF11 resultó significativamente mayor que en Rockefeller. Se observó una disminución significativa de la actividad de esterasas en las larvas sobrevivientes (SANtemF11 [24 h]), la cual se recuperó 24 h después sin exposición a temefos. En el zimograma se observó que en 10 % de las larvas sobrevivientes a temefos, solo apareció incrementada la banda de esterasa A4, en comparación con las observadas en SANtemF11. El peso molecular estimado de la esterasa A4 fue de 58 kDa. Conclusiones: la presencia de una banda específica de esterasa (58 kDa), en las larvas sobrevivientes a la selección con temefos, confirma su papel en la resistencia a este insecticida. Diagnosticar la función de las esterasas en la resistencia a temefos, a través de ensayos bioquímicos, no debe realizarse en larvas expuestas a dosis subletales de este insecticida, para evitar falsos negativos.

Introduction: the esterase enzymes have been defined as the mechanism of resistance to temephos in Aeges aegypti in Cuba, which is the most used larvacide worldwide. Objective: to partially characterize the activity of esterases in exposed and non-exposed larvae at sublethal doses of temephos in an Aedes aegypti strain that is resistant to this product. Methods: a susceptible reference Aedes aegypti strain (Rockefeller) and another temephos-resistant strain (SANtemFII) were used. The larvae from SANtemF11 strain were exposed to lethal concentration 90 (LC90) of temephos (1 ppm); 10 % of the surviving larvae after 24 hours (SANtem[24 h] was moved to clean water, with no exposure to insecticide for 24 hours (SANtem [48 h]). The activity of esterases was partially characterized in these larvae through biochemical assays and gel-polyacrylamide electrophoresis. The molecular weight of esterase A 4 (ESt. A4) was estimated with the support of sodium duodecyl sulophate (SDS-PAGE). Results: the activity of esterases in SANtemF11 was significantly higher than in Rockefeller strain. Significant reduction of the activity of esterases in surviving larvae was observed (SANtemF11 [24 h], but it increased 24 h later without exposure to temephos. The zymogram showed that 10% of larvae that survived from temephos action, just the esterase A4 band increased if compared with those of SAntemF11. The estimated molecular weight of esterase A4 was 58 kDa. Conclusions: the presence of a specific band of esterase (58 kDa) in surviving larvae confirmed the role of these enzymes in insecticidal resistance. The diagnosis of the function of the esterases in resistance to temephos through biochemical tests should not be made in larvae exposed to sublethal doses of this insecticide, in order to avoid false negatives.

Resistencia a insecticidas organofosforados en Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) de Santiago de Cuba, 1997-2009 / Resistance to organophosphorus insecticides found in Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) from Santiago de Cuba, 1997-2009

INTRODUCCIÓN: la resistencia a insecticidas organofosforados en Santiago de Cuba fue diagnosticada en Aedes aegypti (Linnaeus, 1762) en 1997, y alguno de ellos se han continuado utilizando hasta la fecha, de ahí la necesidad de conocer cómo ha variado la resistencia desde entonces, hasta fechas más recientes, año 2009. OBJETIVO: evaluar la resistencia a insecticidas organofosforados en larvas de Santiago de Cuba, colectadas en 2009 y su variación con respecto a 1997. Determinar la frecuencia en que aparece el mecanismo de resistencia, basado en la alta actividad de esterasas y su clasificación. MÉTODOS: se evaluó la resistencia a los insecticidas organofosforados, malation, pirimifos metil, fenitrotion, fention, temefos y clorpirifos en larvas mediante la metodología recomendada por la Organización Mundial de la Salud. El mecanismo de esterasas se determinó a través de ensayos bioquímicos y electroforesis en gel de poliacrilamida. RESULTADOS: las larvas de la cepa de Santiago de Cuba resultaron susceptibles a malation, pirimifos metil y fenitrotion y no hubo variación con los resultados obtenidos en una cepa de Santiago de Cuba de 1997, se observó moderada resistencia a fention y alta a temefos y clorpirifos. Al comparar estos resultados con los obtenidos en 1997, se observó un incremento de la resistencia a los tres insecticidas en el período 1997-2009. En la cepa de Santiago de Cuba de 2009 se demostró que las esterasas se encontraron con una alta actividad a una frecuencia de 0,7. Se observó la presencia de una esterasa tipo B amplificada, con un valor de movilidad relativa de 0,95 cm, la cual no se encontró en la cepa susceptible de referencia. CONCLUSIONES: la resistencia a insecticidas y sus mecanismos es un fenómeno sumamente variable, aun en la misma especie sometida a distintas intensidades de aplicación de insecticidas, de ahí que su monitoreo constante de forma local y en el tiempo sea una necesidad para un programa de control de vectores.

INTRODUCTION: resistance to organophosphorus insecticides was diagnosed in Aedes aegypti (Linnaeus, 1762) from Santiago de Cuba in 1997 and some of them are still used up to date; hence the need of ascertaining how the insecticidal resistance has changed in recent times, particularly in 2009. OBJECTIVE: to evaluate the resistance to organophosporus insecticides in larvae from Santiago de Cuba collected in 2009, and its variation in comparison with that observed in 1997; and to determine the frequency of occurrence of resistance mechanisms on the basis of high esterase activity and its classification. METHODS: resistance to organophosphorus insecticides such as malathion, pirimiphos, methyl, phenitrotion, phention, temephos and clorpiriphos in larvae by using the WHO recommended methodology. The esterase mechanism was identified through biochemical assays and polyacrylamide gel electrophoresis. RESULTS: larvae from the Santiago de Cuba strain were susceptible to malathion, pirimiphos, methyl and phenitrothion; there was no variation with the results achieved in a Santiago de Cuba strain in 1997, moderate resistance to phenthion and high resistance to temephos and chlorpiriphos were observed. When comparing these results with those of 1997, it was noted that resistance to the three insecticides increased in the 1997-2009 period. In the Santiago de Cuba strain 2009, it was shown that esterase activity was very high at a rate of 0,7. The presence of an amplified type B esterase with relative mobility of 0.95 cm was detected, which did not exist in the reference strain. CONCLUSIONS: resistance to insecticides and its mechanisms are highly variable, even in the same species subjected to various intensities in the insecticidal use, therefore, it is necessary to constantly monitor both aspects at local level in the course of time, with a view to an effective vector control program.

Estado de la resistencia a insecticidas y sus mecanismos en Aedes aegypti en el municipio Boyeros / Situation of the insecticidal resistance and its mechanisms in Aedes aegypti in Boyeros municipality

INTRODUCCIÓN: el control de Aedes aegypti continúa siendo la única medida disponible para poder disminuir la transmisión de dengue. Desafortunadamente Ae. aegypti ha demostrado la habilidad de desarrollar resistencia a una gran variedad de tóxicos. OBJETIVO: evaluar la resistencia a insecticidas químicos en larvas y adultos del municipio Boyeros, Ciudad de La Habana, así como los mecanismos que contribuyeron a esta. MÉTODOS: se evaluó la resistencia a insecticidas químicos en larvas y adultos a través de metodologías de la OMS. Los mecanismos de resistencia se determinaron a través de sinergistas y pruebas bioquímicas. Se realizó electroforesis en gel de poliacrilamida para la visualización de enzimas esterasas. RESULTADOS: en larvas se observó susceptibilidad a los insecticidas organofosforados evaluados. Resistencia se observó a los piretroides cipermetrina y deltametrina. Los bioensayos en larvas con el producto comercial de temefos mostraron 100 por ciento de mortalidad con recambio diario de agua hasta 10 d. Se demostró que ni las esterasas, ni la enzima glutatión transferasa, desempeñaron un papel importante en la resistencia a insecticidas en larvas. Se observó la presencia de la esterasa A4 amplificada a baja frecuencia en las muestras estudiadas. En el estado adulto, la cepa Boyeros resultó resistente a los piretroides ciflutrina y lambdacialotrina, en verificación a deltametrina, y resultó susceptible a cipermetrina; también resultó ser resistente al organofosforado clorpirifos y al organoclorado DDT. CONCLUSIONES: estos resultados corroboran que aun el piretroide cipermetrina, a pesar de su uso en el municipio Boyeros, continúa siendo efectivo para el control de Ae. aegypti.

INTRODUCTION: the control of Aedes aegypti remains the only available measure to reduce dengue transmission. Unfortunately, this vector has proved that it is capable of developing resistance to a great variety of toxic substances. OBJECTIVE: to evaluate the resistance to chemical insecticides in larvae and adult vectors in Boyeros municipality, City of Havana as well as those mechanisms supporting it. METHODS: insecticide resistance of mosquito larvae and adults was evaluated with the WHO methodologies. The resistance mechanisms were determined through synergy and biochemical tests. Polyacrylamid gel electropheresis was applied to visualize esterases. RESULTS: larvae were susceptible to the evaluated organophosphate insecticides whereas resistance to pyrethroids, cypermethrin and deltamethrin was observed. Bioassays performed in larvae with temephos-made commercial product showed 100 percent mortality up to 10 days, with daily change of water. It was proved that neither esterases nor glutathione transferase played an important role in larval insecticide resistance. Low frequency amplified esterase A4 was present in the studied samples. In adult stage, Boyeros strain was resistant to pyrethroids ciflutrhine and Lambdacyalothrine, in verification to deltamethrine and susceptible to cypermethrine; it was also resistant to organophosphate chlorpiriphos and organochlorate DDT. CONCLUSIONS: these results confirm that although the pyrethroid cipermethrine has been widely used in Boyeros municipality, it continues being effective for Ae. aegypti control.

Determinación in vivo del papel de las enzimas esterasas y glutation transferasa en la resistencia a piretroides en Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) / Determination in vivo of the role of esterase and gluthation transferase enzymes in pyrethroid resistance of Aedes aegypti (Diptera: Cullicidae)

Se realizó un estudio in vivo a través del uso de 2 sinergistas, el trifenil fosfato (TFF) inhibidor específico de esterasas y el ácido etacrínico (AE), inhibidor específico de la enzima glutation transferasa (GST), para determinar si estas enzimas eran responsables de la resistencia a piretroides en Aedes aegypti. Para el trabajo se utilizaron 2 cepas de Aedes aegypti resistentes a insecticidas, una cepa que fue seleccionada con temefos por 6 generaciones de selección (SAN-F6) y otra con deltametrina por 12 generaciones de selección con este insecticida (SAN-F12), ambas resultaron ser resistentes a insecticidas piretroides. Se demostró a través del uso de los sinergistas TFF y AE que las enzimas esterasas y GST son responsables de la resistencia a los piretroides en estas cepas. Esos resultados demuestran la existencia de un fenómeno de resistencia cruzada y multirresistencia, lo cual debe tenerse en cuenta en las estrategias de uso de insecticidas para el control de este vector.

An in vivo study of two synergists, that is, Triphenil phosphate -specific esterase inhibitor- and ethacrynic acid specific gluthation transferase inhibitor- was performed to determine if these enzymes were responsible for pyrethroid resistance of Aedes aegypti. To this end, two insecticide resistant Aedes aegypti strains were used, one strain selected with temephos by six selection generations (SAN-F6) and the other strain with delmamethrin by 12 selection generations (SAN-F12), being both strains resistant to pyrethroid insecticices. Through the use of TPP and EA synergists, it was proved that esterase and gluthation-s-transferase (GST) enzymes were responsible for pryrethroid resistance of these strains. These results showed the existence of cross-resistance and multidrug resistance, which should be taken into account for insecticide use strategies aimed at vector control.

Adaptación de los métodos para la cuantificación de la actividad de esterasa, acetilcolinesterasa y glutation-S-transferasa en Blattella germanica (Dictyoptera: Blattellidae) / Adaptation of methods for quantification of the effect of esterase, acetylcholinesterase and glutathione-S-transferase in Blatella germanica (Dictyoptera: Blattellidae)

Se estudiaron los mecanismos de resistencia de la cucaracha Blattella germanica, considerada una de las plagas urbanas más importantes al nivel mundial, por ser un vector mecánico que aloja diversos virus, hongos, helmintos y bacterias, sumamente dañinos para el hombre. Existen diferentes métodos de control empleados contra Blattella germanica, dentro de los cuales tiene un papel esencial el uso de insecticidas. Su aplicación indiscriminada ha provocado el desarrollo de resistencia en esta especie. En este trabajo se adaptaron los métodos bioquímicos que permiten detectar las enzimas esterasas, acetilcolinesterasa y glutation-S-transferasa como posibles mecanismos de resistencia, para ello se determinaron todos los parámetros que permiten establecer si una cepa es susceptible o resistente dado cada mecanismo.

Modo de herencia de la resistencia a temefos (abate) en Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) de Cuba / Mode of inheritance of temephos (Abate) resistance in Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) from Cuba

Se realizó el estudio sobre el modo de herencia de la resistencia al insecticida organofosforado temefos, a partir de una cepa de Aedes aegypti de referencia (SAN-F6), resistente, con un valor de factor de resistencia de 200x, comparado con la cepa de Aedes aegypti susceptible a insecticidas (ROCKEFELLER). Se llevaron a cabo cruces genéticos entre la cepa resistente y la susceptible a temefos, obteniéndose una F1 (cruce). Las hembras de esta F1 del cruzamiento se cruzaron con machos de la cepa ROCKEFELLER (retrocruce) y como resultado se obtuvo que la resistencia a temefos se heredó de forma semidominante, mediada por un solo factor. La actividad de Est-A4, observada en la electroforesis en gel de poliacrilamida y medida mediante ensayos bioquímicos, fue mayor en la cepa resistente a temefos (SAN-F6), menor en la cepa susceptible (ROCKEFELLER) e intermedia en el cruce de estas 2 cepas. Un menor efecto del parental resistente fue observado en el retrocruce tanto en la mortalidad con temefos, como en la actividad de la Est. A4. Estos resultados sugieren que la actividad de esterasas pudiera heredarse también, al igual que la resistencia a temefos, como un carácter semidominante

A study on the mode of inheritance of temephos resistance was conducted using a temephos resistant Aedes aegypti reference strain (SAN-F6) with a value of resistance factor of 200x, compared with the insecticides susceptible Aedes aegypti strain (ROCKEFELLER). Genetic crossings were performed between temephos resistant and susceptible strains. An F1 crossing was attained. The females of this F1 crossing were crossed with males from the ROCKEFELLER strain (retrocrossing), and it was found that the temephos resistance was inherited in a semidominant way and as a monofactorial trait. The activity of Est-A4 observed in the polyacrylamide gel electrophoresis and measured by biochemical assays was higher in the strain resistant to temephos (SAN-F6), lower in the susceptible strain (ROCKEFELLER), and intermediate in the crossing of these two strains. A lower effect of the resistant parental strain was observed in the retrocrossing, both in the mortality with temephos and in the activity of Est. A4. These results suggest that the esterase activity may also be inherited, as well as the resistance to temephos, as a semidominant character.

Comparación de 2 poblaciones de mosquitos Aedes aegypti de Santiago de Cuba con diferente conducta de reposo / Comparison of 2 populations of Aedes aegypti mosquitoes from Santiago de Cuba with different rest conduct

Se separaron 2 poblaciones de Aedes aegypti que se colectaron en Santiago de Cuba durante la epidemia de 1997, por manifestar diferentes hábitos de reposo, unos mosquitos reposaban de forma natural en las paredes hasta 1 m de altura (Cepa Santiago de Cuba) y otros se encontraron reposando en los techos de las viviendas (Cepa Santiago de Cuba Techo). Ambas cepas no mostraron diferencias significativas en cuanto a sus características morfológicas. Los mosquitos pertenecientes a Santiago de Cuba Techo presentaronn los mismos parches que los de Santiago de Cuba. La resistencia a los insecticidas organofosforados es muy similar en ambas poblaciones, sin embargo, difieren en la alta resistencia al piretroide deltametrina en Santiago de Cuba Techo en comparación con Santiago de Cuba. Desde el punto de vista bioquímico y mediante el uso del sinergista DEF se demostró que las esterasas están asociadas con la alta resistencia a clorpirifos en ambas cepas, no resultando así las MFO, lo cual se demostró con el sinergista piperonil butóxido. Sin embargo, la enzima GST parece ser la responsable de la alta resistencia detectada a deltametrina en Santiago de Cuba Techo por el valor elevado de frecuencia de ese gen en esta cepa. Se utilizó la técnica del ADN polimórfico amplificado a la azar para observar la variabilidad genética entre las 2 poblaciones; los resultados revelaron que existió polimorfismo genético entre las poblaciones en estudio, lo cual pudiera tener una implicación en la ecología y epidemiología del vector

Determinación de la actividad glutatión-S-transferasa en cepas de Culex quinquefasciatus de Cuba y otros países de América Latin / Determination of gluthation-S-transferase activity in Culex quinquefasciatus strains in Cuba and other Latin American countries

Se optimizó el micrométodo para la determinación de la actividad específica de glutatión S-transferasa en una cepa seleccionada en el laboratorio con lambdacialotrina por 6 generaciones (SP6). Los valores de saturación para glutatión reducido y 1-cloro 2,4-dinitrobenceno fueron 15 mM y 40 mM, respectivamente; el tiempo óptimo de lectura de la reacción que permitió diferenciar la cepa resistente SP6 de la susceptible de referencia SLAB resultó de 3 min. A través del micrométodo ya optimizado se probaron 4 cepas procedentes de Cuba (SANTIAGO DE CUBA, SD4, QUIBÚ y SP6), una de Venezuela (MIRANDA), una de Colombia (MEDELLÍN) y una de Brasil (RÍO DE JANEIRO). Los más altos valores de actividad de la enzima fueron observados en la cepa MIRANDA. Sin embargo, este mecanismo de destoxificación se encontró a muy baja frecuencia en todas las cepas, indicando que no desempeña un papel importante en la resistencia a insecticidas en las cepas de estudio. Se compararon los valores de GST con las frecuencias de esterasas inespecíficas y acetilcolinesterasa modificada para cada una de las cepas estudiadas

Resistencia a insecticidas en larvas y adultos de Aedes aegypti: prevalencia de la esterasa A4 asociada con la resistencia a temefos / Resistance to insecticides in larvae and adults of Aedes aegypti: prevalence of A4 esterasa associated with resistance to temephos

Fueron estudiadas 2 cepas de Aedes aegypti provenientes de 2 Consejos populares con altos índices de infestación de este vector, producto de la necesidad de hacer un control efectivo de larvas y adultos en el municipio Guanabacoa. Se determinaron los niveles de susceptibilidad y/o resistencia a insecticidas organofosforados, piretroides y un carbamato. Los resultados de los bioensayos en larvas mostraron completa susceptibilidad a los insecticidas organofosforados malation, clorpirifos, pirimifos metil y al carbamato propoxur en ambos consejos populares, sin embargo, se observó alta resistencia a temefos y a fention, no se observó resistencia a fenitrotion en uno de los consejos populares, pero sí en el otro. En el estado adulto, a la dosis recomendada por la Organización Mundial de la Salud o por los fabricantes de los productos, se observó resistencia a malation, fenitrotion y propoxur, sin embargo, se obtuvieron mejores resultados con los piretroides, con porcentajes de mortalidad por encima de 90 por ciento. Según los resultados obtenidos, utilizando el sinergista S S S tributil fosforotritiado (DEF) y piperonil butóxido, se demostró que las enzimas esterasas y oxidasas de función múltiple desempeñaron un papel importante en la resistencia a temefos y a fention. Por medio de ensayos bioquímicos se demostró que la amplificada actividad de estas enzimas se encontró a elevada frecuencia en ambos consejos populares, al igual que la enzima glutation transferasa (GST) en uno de los 2 Consejos Populares. Mediante electroforesis en gel de poliacrilamida se observó que en ambos consejos populares prevaleció la amplificada actividad de esterasas A4

Estado de la resistencia a insecticidas y mecanismos de resistencia en larvas del municipio Playa, colectadas durante la etapa intensiva contra el Aedes aegypti en Ciudad de La Habana, 2001-2002 / State of the resistance to insecticides and resistance mechanisms in larvae from Playa municipality collected during the intensive campaign against Aedes aegypti in Havana City, 2001-2002

Se determinaron los niveles de susceptibilidad y/o resistencia a insecticidas en larvas de Aedes aegypti, colectadas del municipio Playa, durante la etapa intensiva de la campaña contra el mosquito Aedes aegypti en Ciudad de La Habana, en el presente año. En larvas, se encontró alta resistencia a los insecticidas organofosforados fention y temefos y moderada a fenitrotion, también se detectó alta resistencia al carbamato propoxur. Las larvas resultaron susceptibles a clorpirifos, malation y pirimifos metil. Los resultados a través del uso de sinergistas indicaron que las esterasas desempeñan un papel importante en la resistencia detectada a los insecticidas organofosforados, pero no en la resistencia a propoxur, sin embargo, las monoxigenasas intervienen solamente en la resistencia a fenitrotion. Estos mecanismos se encontraron a elevada frecuencia en las larvas de este municipio. Se confirmó el papel de las esterasas en la resistencia a temefos mediante ensayos de inhibición en gel de poliacrilamida

Niveles de resistencia a insecticidas y sus mecanismos en 2 cepas de Aedes aegypti de Panamá

Se determinaron los niveles de susceptibilidad y/o resistencia a insecticidas, en larvas y adultos de Aedes aegypti procedentes de 2 localidades de Panamá (Río Abajo y Victoriano Lorenzo). En larvas, se encontró resistencia a pirimifos metil en las 2 localidades, sin embargo, resultaron susceptibles al resto de los insecticidas organofosforados (temefos, malation, fention, fenitrotion y clorpirifos) y a los piretroides (deltametrina, lambdacialotrina, cipermetrina y ciflutrina). En los ensayos de adultos, de acuerdo con las categorías de la Organización Mundial de la Salud, las 2 localidades resultaron también completamente susceptibles a los piretroides deltamentrina, lambdacialotrina, b cipermetrina y ciflutrina.

The levels of susceptibility and/or resistance to insecticides in larvae and adults of Aedes aegypti from 2 localities of Panamá (Río Abajo and Victoriano Lorenzo) were determined. Among larvae, it was found resistance to methyl- pyrimifos in both localities; however, they were susceptible to the rest of the organophosphate insecticides (temephos, malathion, fenthion fenitrothion and clorpirifos) and to pyrethroids (deltamethrin, lambda-cyhalothrin, cypermethrin and cyfluthrin. In the trials carried out in adults, according to the categories of the World Health Organization, the 2 localities proved to be completely susceptible to deltamethrin, lambda-cyhalothrin, b cypermethrin and cyfluthrin.

Estado de la resistencia a insecticidas en cepas de terreno de la especie Blattella germanica (Dictyoptera: Blattellidae) procedentes del municipio Pinar del Río

Se realizó un estudio de los niveles de resistencia a 10 insecticidas: 4 compuestos organofosforados (malation, clorpirifos, pirimifos metil y diazinon), 2 carbamatos (propoxur y bendiocarb) y 4 piretroides (cipermetrina, deltametrina, lambdacialotrina y ciflutrina) en 5 cepas de Blattella germanica (Linnaeus, 1767) colectadas en el terreno, procedentes de la ciudad de Pinar del Río. Se detectaron altos niveles de resistencia a los insecticidas: bendiocarb, cipermetrina y deltametrina; bajo nivel de resistencia a diazinon; moderada a alta a pirimifos metil; así como, susceptibilidad a un insecticida de cada grupo en estudio: clorpirifos (organofosforado), propoxur (carbamato) y ciflutrina (piretroide). Solo una cepa presentó baja resistencia a malation (Inicio Carlos Manuel) y a lambdacialotrina (Consejo Celso Maragoto). Se evidenció resistencia cruzada cipermetrina-deltametrina, que no afectó la susceptibilidad a los piretroides lambdacialotrina y ciflutrina.

A study of the levels of resistance to 10 insecticides: 4 organophosphate compounds (malathion, clorpirifos, methyl-pyrimifos and diazinon), 2 carbamates (propoxur and bendiocarb) and 4 pyrethroids (cypermethrin, deltamethrin, lamda-cyhalothrin and cyfluthrin) was conducted in 5 strains of Blatella germanica (Linnaeus, 1767) collected in the field of Pinar del Río. High levels of resistance to bediocarb, cypermethrin and deltamethrin insecticides; low level of resistance to diazinon; from moderate to high resistance to methyl-pyrimifos, as well as susceptibility to one insecticide in each study group: clorpirifos (organophosphate), propoxur (carbamate) and cyfluthrin (pyrethroid); were detected. Only a strain presented low resistance to malathion (Inicio Carlos Manuel) and to lambda-cyhalothrin (Consejo Celso Maragoto). Cypermethrin-deltamethrin cross resistance was evidenced. It did not affect the susceptibility to lambda-cyalothrin and cyfluthrin.

Resistencia cruzada a piretroides en Aedes aegypti de Cuba inducido por la selección con el insecticida organofosforado malation / Cross resistance to pyrethroids in Aedes aegypti from Cuba induced by the selection with organophosphate malathion

Se sometió a presión de selección una cepa de Aedes aegypti (L.), colectada en el municipio de Santiago de Cuba, con niveles bajos de resistencia a malation (1,79 x), para evaluar la evolución de la resistencia a este organofosforado y su utilidad en el control. Después de 5 generaciones de selección con malation no se logró incrementar la resistencia. Se obtuvo luego de 5 generaciones de selección (SAN-F5), un valor de factor de resistencia (FR50 de 2,22x). Se observó poca o ninguna resistencia cruzada a los insecticidas organofosforados fention, temefos y fenitrotion, sin embargo, se encontró una elevada resistencia cruzada al insecticida piretroide deltametrina, con un valor de 287,5X en la tercera generación de selección, se observó también resistencia cruzada a otros piretroides (lambdacialotrina, cipermetrina y ciflutrina). El mecanismo de esterasas elevadas no generó resistencia a los piretroides, hecho que fue corroborado a través de estudios de inhibición en gel y a través del cálculo de la frecuencia en placas de microtitulación. No obstante, hubo un incremento en la frecuencia del mecanismo de glutation-s-transferasa desde 0,049 en SANTIAGO DE CUBA hasta 0,42 en SAN-F5, lo cual puede estar asociado con la resistencia a piretroides. La resistencia cruzada a piretroides, principalmente a deltametrina, producto de la selección con malation, pudiera limitar el uso de estos insecticidas para el control, si no se lleva a cabo una buena estrategia

Uso correcto de insecticidas: control de la resistencia / Correct use of insecticides: management of resistance

Se hizo una revisión de las estrategias efectivas para el control de la resistencia, las perspectivas, las tácticas. Se planteó que estas tácticas no son excluyentes pues algunos de sus elementos se pueden usar para formular un programa de control de la resistencia a largo plazo y que la estrategia debe estar sustentada en un conocimiento profundo de las implicaciones en la resistencia que cada insecticida candidato tiene y de la biología y ecología de las especies involucradas, y esta estrategia debe de hacer uso de todas las medidas de combate no químicas que estén disponibles

Adaptación de los métodos en placas de microtitulación para la cuantificación de la actividad de esterasas y glutation-s-transferasa en Aedes aegypti / Modification of microtitration plate methods for quantification of esterases and glutathione-s-transferase activity in Aedes aegypti

Se modificaron las técnicas de detección de la actividad de esterasas inespecíficas y de la glutation-s-transferasa, utilizadas en Culex quinquefasciatus, para su detección en Aedes aegypti (L.). Se determinaron para cada una de las enzimas, los valores de concentración óptima de sustrato (concentración saturante) y de tiempo óptimo de lectura de la reacción, mediante la utilización de 4 cepas de Aedes aegypti, 1 de Cuba, 2 de Venezuela y 1 cepa susceptible de referencia. La frecuencia de esterasas inespecíficas resultó ser en MIRANDA de 0,76 en ARAGUA 0,42 y en SANTIAGO DE CUBA se obtuvo el valor máximo de frecuencia de este mecanismo. Para el mecanismo de glutation-s-transferasa la frecuencia resultó ser de 0,45 en ARAGUA, 0,043 en MIRANDA y en SANTIAGO de CUBA de 1. Por primera vez en Cuba se pudo disponer de una batería de técnicas bioquímicas para la detección de los mecanismos de resistencia en Aedes aegypti, esto permitió conformar una base sólida para la detección rápida y temprana de la resistencia en esta especie, principal vector del dengue en las Américas

Esterasas elevadas como mecanismo de resistencia a insecticidas organofosforados en cepas de Aedes aegypti / Elevated esterases as a mechanism of resistance to organophosphate insecticides in Aedes aegypti strains

Fueron evaluadas 5 cepas de Aedes aegypti L., 1 de Cuba y 4 de Venezuela, para determinar sus niveles de resistencia a insecticidas organofosforados (temefos, clorpirifos y pirimifos metil). En las cepas venezolanas se encontró resistencia a temefos, solo en la cepa APURE. En las cepas de TACHIRA y MIRANDA se observaron moderados valores de resistencia (FR50 entre 5 y 10 x) para clorpirifos, y altos niveles de resistencia (FR >10x) fueron obtenidos para este insecticida en la cepa de ARAGUA. Todas las cepas venezolanas mostraron elevados niveles de resistencia a pirimifos metil. La cepa cubana, colectada en SANTIAGO de CUBA, mostró moderados niveles de resistencia a temefos y pirimifos metil, y altos niveles para clorpirifos. Los resultados de las pruebas bioquímicas demostraron la presencia de los mecanismos de esterasas y glutation-s-transferasa, a elevada frecuencia en casi todas las cepas. Mediante electroforesis en gel de poliacrilamida se observó una banda fuertemente teñida en todas las cepas, con un valor de Rf de 0,779, que se nombró esterasa A4, y no se observó en la cepa de referencia susceptible a insecticidas. El significado de esta esterasa en la resistencia a insecticidas organofosforados está aún por demostrar. La resistencia a estos insecticidas en Ae. aegypti es un problema serio para las operaciones de control de esta especie, por lo que se sugirieron estrategias de control integradas que permitan evitar o retardar la aparición de esta en Cuba y Venezuela

Evolución de la resistencia a insecticidas en Culex quinquefasciatus (Díptera: Culicidae) en un área de La Habana / Course of insecticide resistance in Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae) in a region of La Habana

The use of malathion to control mosquitoes in Cuba during 7 years until 1986 selected 2 resistance mechanisms: that of elevated activity of nonspecific esterases and that of altered acetylcholinesterase (Ache) in Culex quinquefasciatus (Say). In Havana, specifically in the area under study (Quibú River), malathion was replaced by cypermethrin in 1987 and cycles of treatment with cypermethrin have been intensively used since 1987 up to now when the populations of Aedes or Culex increase. In Culex quinquefasciatus (Say) from the Quibú River the resistance levels, mainly to malathion, declined significantly from 1986 to 1997. An increase of resistance to pyrethroid was observed during that period of 11 years. The mechanism of elevated esterases rose to a frequency of 1 and there was also an increase in the frequency of the mechanism of Ache. The esterase B1, responsible for the resistance to malathion, but not to pyrethroid, was selected in this population until 1986. Starting from the use of pyrethroid for the control in this area, 2 new phenotypes of esterases named A6 and B6, apparently related to pyrethroid resistance, were selected.

Resistencia a insecticidas en cepas de terreno de la especie Blattella germanica procedentes de Santiago de Cuba / Resistance to insecticides in Blattella germanica species strains from Santiago de Cuba

A study was conducted on the level of resistance to seven insecticides, namely, 3 organophosphate compounds (malathion, chlorpyrifos and pirimiphos-methyl), one carbamate (propoxur) and 1 pyrethroid (cypermethrin, deltamethrin and lambdacialotrine) of three field-collected strains of Blattella germanica (Linnaeus, 1767) from Santiago de Cuba. These strains showed high resistance levels to malathion, cypermethrin, deltamethrin and lambdacialotrine and low resistance to pirimiphos-methyl, and also they were susceptible to chlorpyrifos and propoxur. The levels of resistance to tested organophosphate insecticides such as malathion and pirimiphos-methyl and to pyrethroid compounds like cypermethrin, deltamethrin and lambdacialotrine may be related to the increased production of esterases as a mechanism of resistance. The value of frequency of the resistant genes for enzyme acetylcholinesterase was very low, therefore, the modified acetylcholinesterase is not involved in resistance to insecticides tested in the studied strains from Santiago de Cuba.

Caracterización de la resistencia a insecticidas organofosforados, carbamatos y piretroides en Culex quinquefasciatus del Estado de Miranda, Venezuela / Characterization of resistance to organophosphate insecticides, carbamates, and pyrethroids in Culex quinquefasciatus from the State of Miranda, Venezuela

Resistance of Culex quinquefasciatus from Miranda, Venezuela to the organophosphate insecticides malathion and chlorpirifos was higher than 30x whereas resistance to pyrethroids metylpirimifos, fention, cipametrine, deltametrine, permetrine and lambdacyalotrine and to organochlorate DDT was lower than 4x. Resistance mechanisms were analyzed with piperonyl butoxide synergist (multifunction oxidases) and S.S.S. phosphotrithiate tributyl (DEF, esterase inhibitor). Multifunction oxidases did not play a significant role in resistance to organophosphate insecticides and carbamate; however, esterases were only mechanisms of resistance to malathion and chlorpirifos. The only insecticide affected by DEF and PB was cipermetrine. Biochemical tests revealed a very low frequency of the altered acetylcholinesterase mechanism (0.13). Esterase frequencies were high (1). Electrophoresis exposed the B1, A6 and B6 esterase phenotypes.